杨宁波等[14]通过如图3.1（a）和（b）两种擦拭路线擦拭，数据显示擦拭取样方式（b）较擦拭取样方式（a）的样品回收率要高。造成这种结果的原因可能是方式（a）中棉签来回往复运动，将部分残留物压挤到了擦拭边框里，最终导致回收率偏低。
表面擦拭引起的被检测物的损失主要是由棉签和设备表面的潴留引起的，我们提出被检测的平均回收率≥50%，平均回收率的RSD＜20%。当平均回收率小于这个值或平均回收率的RSD值不小于20%时，方法应当修改。最终检测结果将根据最小回收率进行调整，即检测结果除以最小回收率，以补偿棉签和设备表面的潴留引起的损失。
4 分析方法验证 分析方法验证，目的是证明该方法能够准确测定目标残留物量，进而判断清洁后的目标残留物是否低于其残留限度值。
4.1 检验方法 检测清洁残留物活性成份及其中间体，主要使用到的检测方法有总有机碳法（TOC）、气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）等方法。 TOC 方法对所有的有机化合物均能响应[15]，由于其检测的是总有机碳的含量，因此其专属性没有色谱法明显，无法对每一种残留物进行准确定量，灵敏度也不够高，而且受外界干扰太多，取样工具必须不含有碳。而在国内，TOC 方法多用于测定水体介质有机物总量[16-18]，不用来准确定量清洁验证中残留物的含量。GC 方法由于其对样品要求较高，需要的样品热稳定性好，因此在清洁验证中通常用来进行溶剂残留量的检测[19]。 液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术，是色谱法中最古老的一种，但通过改进填料的粒度及柱压在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论在技术上采用了高压输液泵高效固定相和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，因此被称为高效液相色谱法(HPLC)。HPLC 的测定法有：内标法、外标法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法和面积归一化法。因清洁验证测定物质一般为已知物，对照品容易得到，通常采用外标法进行清洁验证中残留样品的测定。
4.2 验证方案和报告 清洁验证分析方法验证方案包括：封面、验证方案起草审核审批表、目录、正文、附件与修订情况。正文应包括以下内容：验证背景、验证目的范围和接受标准、验证组织、验证前确认工作、验证实施方案、偏差与变更处理、再验证周期。附件包括文件检查确认记录、检验仪器确认记录、人员培训确认记录、验证实施记录，验证实施记录包括溶剂、流动相比例、流速选择试验，定量限试验，检测限试验，线性和范围试验，重复性试验和回收率试验。 定量限：系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求。一般验证采用信噪比法，即用于能显示基线噪声的分析方法，把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量。以信噪比为10 ∶1~15∶1时相应浓度或注入仪器的量作为定量限，同时定量限的浓度须在限度要求浓度的50%以下。 检测限：又称为检出限，指由基质空白所产生的仪器背景信号的3倍值的相应量，或者以基质空白产生的背景信号平均值加上3倍的均数标准差。是方法（方法检测限MDL）和仪器（仪器检测限IDL）灵敏度体现的重要指标之一。以信噪比为3 ∶1~5∶1时相应浓度或注入仪器的量作为检测限。 线性和范围：分析方法的线性是获得的测试结果与样品中被测物的浓度成比例的能力，范围指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。一般以最低浓度点为定量限浓度，另外3个浓度点在最高与最低浓度范围内合理设定，线性相关系数应≥0.999。 重复性试验：指在既定条件下，获得一系列同一均匀样品的多次取样测量值之间的接近程度，一般选用某浓度溶液，重复进样6次，计算主峰面积的RSD，主峰面积RSD≤2.0%。 严格按照清洁验证分析方法方案进行验证，实验采集数据后进行结果评价，最终获得结论，比如线性试验结果中浓度与峰面积呈良好的线性关系，方法的重复性是否符合规定，回收率是否符合规定。当结果不合格时，需要进行程序修改，查找原因并重新验证，直到使最终验证结果合格为止，实施验证后需要详细起草编写清洁验证分析方法验证报告。 清洁验证分析方法验证报告内容包括：封面、验证报告起草审核审批表、目录、正文、附录与修订情况。正文应包括以下内容：背景、验证方案名称及编号、验证实际进度、分析方法验证职责与分工、分析方法验证的实施、清洁验证分析方法、验证结果分析方法验证结论与偏差与变更处理。附录包括文件检查确认记录、检验仪器确认记录、人员培训确认记录、验证实施记录及图谱、清洁验证实施记录。
4.3 清洁周期和再验证 变更管理针对于通过验证设备清洁规程方法变更产品增加产品处方改变，会从一定程度上导致清洁设备规程发生变更，应当由专门人员审核，新建人员提交的变更申请之后，决定是否开展再验证，当出现下列其中一种情形时，需要严格按照有关的清洁规程完成再验证 ：第一，所采用的清洁剂或者需要重新修改清洁程序；第二，增加很难清洗的生产产品；第三，设备变更；第四，规程中明确再验证需求[20]。
5 总结 GMP 的宗旨是最大限度地降低药品生产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险。清洁验证既是保证患者用药安全的一个重要要素，通常也是FDA 检查中的关键项，制定有效的清洁规程是防止污染、 交叉污染的重要举措之一。而有效的清洁规程需要充分的清洁验证来证明。本文阐述了清洁验证实施过程中的关键流程与清洁验证分析方法验证关键点，制药企业应结合自身情况采取相应策略，不断完善和改进清洁验证工作。 总而言之，对于制药企业来说，只有严格执行清洁规程，定期进行设备清洁验证并做好设备的日常清洁工作，才能确保药品的质量安全。参考文献
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